第三节脐带间充质干细胞
治疗外周神经损伤
周围神经是指中枢神经(脑和脊隨)以外的神经，包括12对脑神经、31对自主神经(交感神经、副交感神经)包含神经节、神经干、神经丛及周围神经装置。周围神经损伤是指由于牵拉、切割、压迫、缺血、火器伤、中番等各种原因引起该神经支配的区域出现感觉障碍、运动功能障碍和营养功能障碍。常见的外周神经损伤有臂丛神经、神经、肌皮神经、正中神经、桡神经、尺神经、股神经、坐骨神经和腓总神经损伤，周围神经损伤一般不会危及生命，但可引起相应组织器官的功能障碍。临床上表现为损伤神经所支配的区域内肌肉痪、皮肤菱缩、感觉减退或消失。周围神经损伤在平时和战时均较为多见，在第二次世界大战中，四肢神经损伤约占外伤总数的10％，火器骨折伤中约有60％合并外周神经伤。周围神经损伤的治疗原则是:手术修复受损的神经，减压法解除神经压迫、松解法解除瘀痕连、炼恢复肢体功能和营养神经等，对于严重断裂的外周神经修复治疗常采用自体神经移植法，这些方法在外周神经损伤的修复中发挥了积极作用、但仍然是临床医学中的重要难题之一。间充质干细胞的出现，为外周神经损伤的修复治疗提供了一种新的思路。研究已经证实，骨髓、脐带来源的间充质于细胞移植可促进脑损伤后的神经再生与修复，但对周围神经损伤的修复作用及机制尚不十分明确。新近的一些发现，在外周神经的受损伤周国移植UCMSC可促进受损伤的外周神经修复。为进一步证实UCMSC对外周神经损伤的作用和机制，本实验室进行了UCMSC诱导后的神经样细胞移植治疗坐骨神经损伤的研究。研究结果如下:
用钳夹法建立树鼩坐骨神经损伤模型:麻醉后固定树鼩，伏消做大腿切口，钝性分离筋膜肌间组织充分暴露坐骨神经，暴露至梨状肌下缘5mm处，持针器中间咬合夹伤坐骨神经。术后单独分笼饲养，缝合伤口。树鼩模型随机分为2组:脐带间充质干细胞源神经细胞治疗组和对照组。坐骨神经损仿的病理验证:分离树鼩坐骨神经，取雕分又上0.5-1.5cm神经段，4％多聚甲固定36小时，进行漂洗、透明、脱水等步骤后用液体石蜡包埋并切片。将病理切片脱蜡后用梯度酒精脱组织及细胞内水分，苏木素染色后漂洗，伊红染液复染后漂洗，再次用梯度酒精脱水，二甲苯透明后滴中性树胶封片。37℃干燥后常温保存，在显微镜下观察组织形态。
按前述的本实验室UCMSC方法。按前述的脐带间充质干细胞源神经样细胞治疗颅脑损伤树鼩模型研究中的方法制备、鉴定树鼩UCMSC、诱导获得神经样细胞。造模成功24小时后，将转染了GFP基因或者DiL标记的神经样细胞悬液(含1×个细胞)，以1ml的PBS液重悬，移植到坐骨神经损伤树鼩模型的坐骨神经及周围肌肉组织中，对照组在相同部位注入等休积的PBS液，移植后不给动物使用任何免疫物制剂。植人细胞12周后，以3％戊巴比妥钠度腔麻醉。迅速取出坐骨神经1cm，置10％甲盛固定4小时，30％糖溶液浸泡脱水3天。冷冻切片后，进行荧光免疫组化观察。
结果采用夹法进行造模，通过材的外观、活动和坐骨神经的病理切片证实，已成功建立坐骨神经损伤树鼩模型，正常对照组整体神经纤维分布较均匀，走向较为一致，而造模组神经纤维排列曲折，神经纤维排列稀疏(图12-6)体外分离培养树鼩脐带间充质干细胞诱导分化为神经细胞后，通过免疫荧光技术证实为神经样细胞。将树鼩脐带间充质干细胞源神经样细胞植人坐骨神经损伤树鼩模型后，通过坐骨神经组织病理切片和免疫荧光技术，证实脐带间充质干细胞源神经样细胞移植入坐骨神经损伤树鼩坐骨神经内后，有效改善坐骨神经损伤状况，并且植入的细胞可以在树鼩体内存活、定植和迁移。脐带间充质干细胞源神经样细胞治疗8周后，神经纤维排列较为整齐、均匀，单位面积再生神经纤维密度高
(图12-7，图12-8)
图12-7移植的脐带间充质干细胞源神经干细胞样细胞在树鼩坐骨神经内存活、迁移和分化
A.DAPI染色(蓝色);B.树鼩坐骨神经内的细胞在移植前以GFP标记(録色);C.损伤的坐骨组织中Tubulin免疫荧光染色(红色)的阳性细胞;D.Merge
图12-8移植UCMSC源神经干细胞样细胞在树鼩的坐骨神经内存活、迁移和分化
A.DAPI染色(蓝色);B.树鼩坐骨神经内的细胞在移植前以Dil标记(红色)；C.损伤的坐骨组织中NSE免疫荧光染色(红色)的阳性细胞；D.Mage
细胞移植治疗12周后，免疫荧光染色发现，移植的脐带间充质干细胞源神经干细胞样细胞可以在树鼩坐骨神经内存活，迁移和分化。
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文章载自：脐带间充质干细胞转化医
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