肺脏是脓毒症病理过程中最早且最常衰竭的器官，脓毒症患者于病程早期阶段即可出现肺部损伤，很快进展为急性呼吸窘迫综合征（acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS）目前，关于脓毒症ALI确切的发病机制尚不清楚。前期研究显示，通过使用药物抑制剂坏死抑制素-1（Necrostatin-1）或基因敲除关键分子受体相互作用蛋白激酶（receptor-interactingproteinkinases，RIPK1、RIPK3）阻断TNF介导的细胞程序性坏死（necroptosis）通路，可以有效减轻肺脏的炎症反应和损伤相关分子模式的数量，从而保护机体免受脓毒症的致命侵袭，表明细胞程序性坏死在脓毒症ALI的病理过程中发挥一定的作用。然而细胞程序性坏死通路触发的下游效应即坏死性炎症反应在脓毒症ALI中的作用及其机制尚未明确。本研究通过检测脓毒症小鼠体内坏死性炎症相关分子，即混合谱系激酶结构域（mixedlineagekinasedomainlike，MLKL）、NOD样受体蛋白3（NOD-likereceptorprotein3，NLRP3）和白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的表达水平及肺组织病理改变，观察特异性抑制剂Necrostatin-1对MLKL-NLRP3通路的影响，初步探索MLKL-NLRP3
动物分组实验动物：清洁级雄性BALB/c小鼠，体质量30～35g，8～10周龄18只。
实验分组及处置：采用随机数字表法将BALB/c小鼠分为假手术组（Sham组）、盲肠结扎穿孔术（cecalligationandpuncture，CLP）致脓毒症模型组（CLP组）和Necrostatin-1干预组（CLP+Nec-1组），每组6只。
检测指标以及方法小鼠一般情况观察
血清和肺组织标本采集：术后2d经眼眶取血并提取血清。
苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织形态学改变
干湿重法检测肺组织含水率
EB法检测肺血管通透性
蛋白质免疫印迹试验（Westernblotting）检测MLKL和NLRP3蛋白表达
ELISA检测血清IL-1β水平
各组小鼠一般情况Sham组小鼠精神状态良好，进食饮水较积极，活动量不减，未发现其他明显的异常反应；开腹后腹腔内未见明显渗液，肠管表面整洁无粘连。CLP组小鼠意识不清、嗜睡、触觉迟钝、身体蜷缩，体力活动减少，进食饮水次数明显减少，大便呈稀水样，腥臭味加重，有时出现腹泻，少部分小鼠眼睛周围可见脓性分泌物；腹腔内可见脓血性渗液，部分可见包裹性积液，肠管水肿扩张、粘连，盲肠呈黑色。CLP+Nec-1组小鼠精神状态优于CLP组，活动量轻微减少，进食饮水次数基本正常；开腹检查时可见结扎的盲肠坏死变黑，腹腔脓血性渗液量少于CLP组。
肺组织病理改变肺组织形态学改变（图1）：Sham组肺组织支气管结构清楚，肺泡大小均匀、结构完整，肺泡上皮细胞形态正常，肺泡间隔未见异常，肺微血管无异常变化，肺间质无炎性浸润、出血。CLP组肺泡壁增厚、损伤和断裂，肺血管充血扩张，肺间质和肺泡腔内充血水肿、中性粒细胞广泛浸润。CLP+Nec-1组肺组织病理形态学改变介于Sham组与CLP组之间，肺组织轻微水肿，肺泡壁稍微增厚，肺泡及肺间质发生中性粒细胞浸润及出血现象较CLP组明显减轻。
肺组织含水率（表1）：与Sham组比较，CLP组肺组织含水率明显增加（P＜0.01）。CLP+Nec-1组肺组织含水率则较CLP组明显减少（P＜0.01）
肺血管通透性改变（表1）：与Sham组比较，CLP组肺组织EB含量显著增加（P＜0.01）。CLP+Nec-1组肺组织EB含量显著下降（P＜0.01）。表明CLP组小鼠肺血管通透性较Sham组显著升高，而在注射Necrostatin-1后，小鼠肺血管通透性下降。
坏死性炎症相关分子坏死性炎症相关分子表达（图2；表2）：与Sham组比较，CLP组肺组织中坏死性炎症相关分子p-MLKL和NLRP3的蛋白表达及血清中细胞因子IL-1β水平均显著上调（均P＜0.01）。与CLP组比较，CLP+Nec-1组肺组织中p-MLKL和NLRP3的蛋白表达及血清IL-1β水平均显著下调（均P＜0.01）。
来源：李娜,朱雄,程远,何庆-《中华危重病急救医学》-年5期
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