猪支原体肺炎病理学诊断方法

来源：本站原创
时间：2021/11/27 11:16:23

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导读

猪支原体性肺炎（mycoplasmalpneumoniaofswine，MPS）是由猪肺炎支原体（mycoplasmahyopneumoniae，MHP）引发的一种高发病率、低死亡率慢性呼吸道传染性疾病，国外常称为猪地方流行性肺炎（swineenzooticpneumonia），我国俗称猪喘气病。本病典型临床症状是咳嗽和气喘，与其他病原共同感染后有发热、食欲废绝、呼吸困难等症状。主要组织病变是融合性支气管肺炎，在肺的尖叶、心叶、中间叶和膈叶前缘呈“胰样”或“虾肉样”实变。其广泛分布于世界各地。长期以来，本病一直被认为是对养猪业造成重大经济损失，最常发生、流行最广、最难净化的重要疫病之一。本病虽为老病，但近年来由于经常和PRRS、圆环病毒等其他病原混合感染，造成重大的经济损失而突显出了其重要性。本文就猪支原体肺炎的主要病理学变化及病理诊断方法做简要探讨。

1病理变化

1.1剖解病变

尸体消瘦，被毛蓬乱，主要特征是融合性支气管肺炎。在肺脏的尖叶、心叶、中间叶和膈叶前缘有细小实变病灶，呈“胰变”或“虾肉样变”，淡红色，切片湿润、多汁、富有光泽。肺门和纵膈淋巴结明显肿大、质硬、灰白色、切面多汁。个别病例在病灶周围的肺组织有局灶性肺气肿。心脏质软，右心扩大。肝脏体积增大，边缘钝圆，色泽灰黄，浑浊无光泽，质地较软脆，结构较为模糊。个别病例脾脏不同程度的肿大，质地变脆，皱缩。肾脏也发生轻微肿大，颜色褐黄，呈淡黄色，质地较软，切面隆起，边缘外翻。

1.2组织病变

对病例进行剖检，采取支气管、肺、肝、脾等病理材料，在10%的中性甲醛溶液中固定，进行石蜡包埋切片，然后HE染色、镜检，观察记录各组织器官典型的组织学变化。

1.2.1肺脏

病猪肺脏呈典型间质性肺炎特征，以单核巨噬细胞灶状增生为主。间质轻度增宽，肺泡壁增厚，毛细血管轻度充血，肺泡上皮肿胀、脱落，肺泡腔内有大量浆液、中性粒细胞、淋巴细胞和少量的嗜酸性粒细胞。在细支气管腔内有大量的粉红色浆液、红细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞浸润并围成套管。细支气管周围及组织间隙可见多层的淋巴细胞和成纤维细胞，有的病例尚有数量不等的嗜酸性粒细胞，出现“套管现象”。小支气管周围肺泡扩大，肺泡腔内充满大量的炎性渗出物，并有多数的小病灶合成大片实变区。小支气管周围淋巴样细胞积聚明显，甚至小支气管气管腔变窄或内壁突起，气管黏膜上皮增殖变厚，有时发生轻度剥落。

1.2.2淋巴结

滤泡集中，数量增多，皮质部及副皮质区增宽，淋巴细胞增生，散在出血灶，淋巴周围组织内单核巨噬细胞增生。淋巴结管壁肿胀，核变大，有纤维性渗出物。髓窦内弥漫性出血，并侵及副皮质区，呈现增生性出血性淋巴结炎现象。

1.2.3脾脏

白髓体积缩小，滤泡消失，仅在中央动脉周围残存有少量淋巴细胞，脾小粱增多，脾窦内有单核类细胞增生。脾脏组织间隙可见有中性粒细胞和少量嗜酸性粒细胞浸润。

1.2.4肝脏

肝细胞索排列紊乱，肝细胞肿胀，发生颗粒变性，胞浆淡染，胞浆内可见到大量红染的蛋白质颗粒。中央静脉扩张，肝血窦狭窄或闭锁，肝小叶内小灶状出血。

1.2.5肾脏

肾小球毛细血管轻度出血，肾小管上皮细胞颗粒变性及水泡变性。

1.2.6心脏

心肌纤维颗粒变性，增粗，横纹紊乱，着色不均。

1.2.7肾上腺

皮质部多形带及束状带细胞萎缩，核集中，发生颗粒变性，脂质小泡消失。髓质细胞空泡变性，散在小灶状出血。

2病理学诊断方法?

2.1病理切片的制作

由于对猪支原体肺炎病理学观察所用的标本小，故宜采用石蜡切片法。一般用苏木素、伊红染色常规制片。在制片的过程中，每个步骤都会影响到最终观察的效果，所以从取材到封片都应该注意。

2.1.1取材

取材是制片的第一步，猪支原体肺炎的标本取材一般取手术摘除、屠宰猪或新鲜尸体的心、肝、脾、肺、肾、肺门淋巴结和肾上腺，最主要的是采取肺组织。取材时应注意：材料越新鲜越好，防止组织发生收缩、变形和自溶；一般大小为（1.0×1.0×0.3）cm，剪或刀要锐利，避免揉、挤和压组织。

2.1.2固定

一般用10%的中性福尔马林根据组织块的大小、温度高低固定24h左右，使细胞内的物质成为不溶性，保持组织或细胞的原有形态结构并易于染色，固定时间过长会影响染色。固定时应注意：1）采集标本一要及时，（标本新鲜，所用器械防止接触固定液）。2）容器口及容器宜大以方便组织的取放。3）于容器底部铺垫棉花，利于固定液均匀渗透组织；固定液要足量，一般取固定组织体积的10～20倍；防止组织变形，在肺组织的表面覆盖纱布或棉花使其下沉，以充分固定。

2.1.3冲洗

固定后的标本用水冲洗12～24h，洗去未与组织结合的固定液及沉淀物，以免沉渍于标本中影响制片和染色。可将橡皮管出水端插入瓶底，让水从瓶底缓慢流出面更新，瓶口罩纱布防组织冲出瓶外。同时，为保持组织的完整性，水流速度不宜过快。

2.1.4脱水

经固定和水洗后的组织块，含有大量水分，必须用能与透明剂相混溶的脱水剂把水分置换出来，便于透明。脱水剂以乙醇最为常用。一般采取从低浓度到高浓度的顺序进行：70%酒精（约15min）—80%酒精（约2h）—90%酒精（约2h）—95%酒精Ⅰ（约1.5h）—95%酒精Ⅱ（约1.5h）—无水酒精Ⅰ（约1.5h）—无水酒精Ⅱ（约1.5h）。较小的肝脾等组织可适当缩短时间，但在无水酒精中不宜放置太久。另外，脱水必须在有盖的容器中进行。

2.1.5透明

透明是制片过程中很重要的环节。最常用的透明剂为二甲苯，其渗透力强、溶解石蜡量大、易挥发，适合于一般组织的透明。但二甲苯容易使组织强烈收缩、变硬和变脆，故透明时间不能太长。透明顺序为：二甲苯Ⅰ（15～20min）—二甲苯Ⅱ（15～20min）。二甲苯必须保持无水，且在有盖容器中进行，所用器械必须干燥，天气潮湿时更应注意。当组织被透明剂充分浸渍时，光线可透过，组织呈现不同程度的透明状态。若组织经透明剂处理后不透明，可能与组织脱水不彻底有关，需重新脱水；或与组织太厚、透明时间不够及组织本身性质有关。

2.1.6浸蜡

用石蜡去置换、替代组织中的透明剂，使组织具有一定的硬度，有利于切片。一般用熔点为56℃以上的石蜡，在60℃的恒温箱中分3次浸蜡，总浸蜡时间在4h左右为宜。时间过长，易造成组织脆硬，切片易碎不成张；时间不足，组织较软，难以切成完好的切片。

2.1.7包埋

将用于包埋的石蜡在温箱中多次融化，充分沉淀（有杂质时应过滤）后，倒入包埋框，再用加温后的镊子将浸好蜡的组织块包埋面向下放进熔蜡中，轻压组织块紧贴包埋框底，标记后自然冷却凝固变硬后取出蜡块进行修整。修整蜡块时，组织周围的石蜡一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。蜡片太窄时，不利于连续切片，若遇断片还易损坏组织；太宽时，影响展片。室温过高时，将修切好的蜡块放置于冷水或冰箱中，以增加其硬度。

2.1.8切片

用切片机将修整好的蜡块切成厚度为5μm的切片。为了能制作出理想的切片，最好使用经清洗液和95%乙醇处理过的载玻片。在摇动旋转轮时，用力均匀、平稳，速度保持在40～60r/min为宜。若遇硬化过度的组织或肝脾等，动作尤以轻柔，以防因产生震动而使切片出现碎裂现象。另外，在展片时，温度一般在45℃左右，烤片温度在60℃左右，并应及时清除水中的蜡屑等杂物，防止污染切片。易脱片的组织，应使用预先涂有蛋白甘油的载玻片进行捞片和展片。

2.1.9染色

采用人工操作苏木素－伊红染色法。

2.1.9.1脱蜡

二甲苯Ⅰ（3～5min）—二甲苯Ⅱ（3～5min）—无水酒精Ⅰ（1～2min）—无水酒精Ⅱ（1～2min）—95%酒精Ⅰ（1～2min）—95%酒精Ⅱ（1～2min）—80%酒精（1～2min）—自来水洗（片刻）。

2.1.9.2染色

苏木素浸染（10～20min）—自来水洗（片刻）—1%盐酸酒精分化（3～5s）—自来水洗（片刻至数小时）—饱和碳酸锂溶液（1min）—自来水洗（15min至数小时）—0.5%的伊红酒精浸染（2～3min）。

2.1.9.3??脱水、透明

95%酒精Ⅰ（1～2min）—95%酒精Ⅱ（1～2min）—无水酒精Ⅰ（1～2min）—无水酒精Ⅱ（1～2min）—二甲苯Ⅰ（1～2min）—二甲苯Ⅱ（1～2min）。

2.1.10封固

为了便于诊断和长期保存，组织切片必须用盖玻片进行封固，一般用中性树胶封固。封固使得染色后的组织切片封闭于载玻片和盖玻片之间，盖玻片下禁止出现气泡，避免直接与空气接触，发生氧化褪色。

2.2染色镜检

染色切片中的细胞核、钙盐、黏液和各种微生物被染成蓝色、深蓝色或灰蓝色；细胞质呈淡红色，细胞质内嗜酸性颗粒呈鲜红色。质量优良的HE染色切片组织结构清晰、细胞核与细胞质蓝红相映，核膜及核染色质颗粒清晰可见，组织或细胞的一般形态及很多物质成分均能显示出来，且能长期保存，不易褪色。

3小结

病理学诊断是猪支原体肺炎的诊断方法之一，但是在病理切片的制作过程中，却因为各种因素而影响最终的镜检结果。制片从取材到染色，每一步都有严格的时间控制。另外，试剂的选择、仪器和使用、周围环境如温度、湿度等也会在很大程度上对制片产生影响。经过多次的尝试，确定一个合理的时间程序和找出方便容易的制片方法是获得优良切片的重点。

来源/猪业科学

摘编自/浦同灿，马磊，嵇辛勤