一、巴（Papanicolaou）氏染色法：
染色原理：
核酸带有磷酸基，其等电点为pH1.5-2.0,因此，当pH值大于2.0时，核酸带负电荷，能结合带正电荷的碱性染料氧化苏木素矾，而呈紫蓝色。天然苏木素的染色力极弱，需经黄色的氧化汞氧化成苏木素红或称氧化苏木素，才具有染色性。但苏木素红呈弱酸性，其等电点是pH6.5，阳离子电荷不强，尚须与含铝（铵明矾、钾明矾或铁明矾）金属的媒染剂结合，成带强正电的大分子带色体氧化苏木素矾，才更具有亲和力，与DNA磷酸复合物牢固地结合，甚至不易被醇、水所洗脱。
染液中的伊红、亮绿、橘黄等为酸性染料，俾斯麦棕为盐基性染料，能与细胞浆中具有相反电荷的蛋白质结合，而染成鲜艳结构。在胞浆染液中，加适量磷钨酸作媒染剂，并调整pH为5.2左右，以增强其着色力。在染液中由于核染液苏木素是水溶液，标本片应经高浓度酒精（固定液）到低浓度逐渐入水，不宜骤然直接入水。而胞浆染液却是95%乙醇液，因此，又必须由低浓度酒精到高浓度逐渐脱水，而后完全无水，经二甲苯透明封片。否则水除不尽，二甲苯不能透入，标本混浊不清。
试剂：
1、赫（Harris）氏苏木素染液：
苏木素1g
无水乙醇或95%乙醇10ml
硫酸钾铝20g
蒸馏水ml
黄色氧化汞0.5g
配制方法：
（1）将苏木素粉溶于无水乙醇中。
（2）将硫酸铝钾置于ml烧杯中，加ml蒸馏水，加热使其完全溶解，到90℃时，加入苏木素乙醇液并迅速加热至沸腾。
（3）立即离开火源，将黄色氧化汞加入上液并随时搅拌，加汞时应注意防止沸溢（因此要求容器大5倍），再继续加热至溶液呈深紫色为止，立即置冷水中冷却，以免过度氧化为棕色沉淀。
（4）次日过滤，置棕色玻璃瓶中至少放置2周后使用。并且在每ml苏木素染液中，加冰醋酸5ml,则核的染色较佳。
注意事项：
（1）必须用优质的三角烧瓶，并且容积要大，以免在加苏木素或氧化汞时染液溢出。
（2）三角烧瓶在放入到火上之前，必须把烧瓶外的水分擦干，以免遇火破裂。
2、橘黄G6:
以橘黄G0.5g溶于5ml蒸馏水中，待溶解后加乙醇至ml，然后再加磷钨酸15mg.
3、EA36:由下面染料配制而成：
（1）亮绿液：亮绿0.5g溶于5ml蒸馏水中，再加纯乙醇至ml.
（2）俾斯麦液：俾斯麦棕0.5g溶于5ml蒸馏水中，再加纯乙醇至ml。
（3）黄色伊红液：黄色伊红0.5g，溶于5ml蒸馏水中，再加纯乙醇至ml。
将上述亮绿液45ml、俾斯麦棕液10ml、黄色伊红液45ml混合后，再加磷钨酸0.2g和碳酸锂饱和液1滴。
4、稀碳酸锂溶液：
在ml蒸馏水中，加饱和碳酸锂1至数滴。
5、0.5%盐酸乙醇溶液：
取浓盐酸0.5ml，加70%乙醇溶液至ml。
6、各种不同浓度的乙醇：
若用95%乙醇配成。可采用下法：例如95%乙醇配成70%乙醇，方法是：取ml刻度量筒，加入95%乙醇70ml，再加水至95ml。若须其它浓度则以此类推。
操作方法：
1、将已固定的涂片依次浸入80%、70%、50%乙醇内半分钟左右，最后置于水中。约1分钟左右。
2、在苏木素染液内染5-10分钟，取出水洗。
3、浸入0.5%盐酸乙醇溶液内数秒钟，以洗去细胞内多余的苏木素液，待涂片转为浅红色取出。用水冲洗2分钟。
4、浸入稀碳酸锂中蓝化1-2分钟，观察涂片变蓝，然后用水冲洗2分钟。
5、依次在50%、70%、80%乙醇溶液内脱水1-2分钟，最后在95%乙醇中脱水二次。
6、在橘黄G6染液中染2分钟。
7、在95%乙醇中浸洗二次。
8、EA36染液中染2-3分钟，至胞浆着色鲜明。
9、95%乙醇中浸洗2次，以洗去多余染色剂，同时可以脱水。
10、再浸入纯乙醇中脱水二次。
11、浸入二甲苯中透明过三个缸即透明三次。
12、用光学树脂胶加盖片封固。
注意事项：
1、巴氏染色的涂片需要严格遵守湿固定原则。
2、固定液若为95%乙醇，浓度不能低于90%。固定时间15-30分钟。
3、苏木素液浸染时间，随气温和染料情况酌情改变。夏季或放置较久的的苏木素容易着色，时间要缩短。冬季或新配制的苏木素和应用已久较稀释的苏木素不易着色，时间要延长，具体时间，看涂片情况灵活掌握。苏木素液着色后的涂片颜色是：新配制的染液为桔黄色，使用较久的染成紫红色，陈旧的苏木素染成深蓝色。
4、盐酸酸化这一步骤是染色的关键，由于酸化作用转瞬之间由紫变红色，此时应立即投入自来水水洗，不宜过久，否则会将全部颜色消失，水洗时水流过大容易脱片，故以轻轻漂洗为宜。如果水洗不净，酸化作用仍会继续进行。
（注：黄色氧化汞，中文别名三仙丹，剧毒！！！）
染色结果：
1、上皮细胞：核呈深蓝色或深紫色，核仁红色，胞浆粉红色或蓝绿色。
2、红细胞与白细胞：红细胞呈鲜红色，白细胞淡蓝色，而核深蓝黑色。
3、细菌：呈灰色。
4、滴虫：淡蓝灰色。
5、粘液：淡蓝或粉红色。
二、苏木素伊红染色（H-E染色）法：
染色原理：
与巴氏染色法基本相同，所不同的是用伊红代替EA36和橘黄G6。此法染色透明度较好，核浆对比鲜明，也是细胞学常用的染色法之一。并因染色液透明性强，适用于粘液和细胞核多的痰液涂片，效果更佳。但染液的多彩性不够，不宜作细胞分化情况观察，如阴道涂片测定激情素水平。
试剂：
苏木素、盐酸乙醇液、稀碳酸锂液、各种浓度乙醇溶液等同巴氏染色法。
伊红染液：
伊红Y1g加蒸馏水ml,再加0.5ml的冰醋酸，然后用玻璃棒搅拌，直到全部搅拌成泡沫状取出。将泡沫消失后的溶液每25ml加75ml95%乙醇溶液即可使用。
简单配置法：
将伊红Y1g加入5ml蒸馏水中溶解，然后用70%乙醇加至ml即可使用。
操作方法：
1、涂片经固定后取出浸入水中，洗去固定液。
2、在蒸馏水中浸洗数秒钟，以减少涂片的碱性，延长苏木素染色的使用时间。
3、置苏木素液内染核5-10分钟，水洗数秒钟。
4、置盐酸乙醇溶液内数秒钟，水洗。
5、置稀碳酸锂溶液中蓝化或放入自来水中至标本转为蓝色为止。
6、置伊红染液中染胞浆1-2分钟，以水冲洗去掉多余染色液。
7、依次置于50%、70%、80%、95%乙醇溶液中脱水各半分钟，再置于无水乙醇中1分钟。
8、用二甲苯透明2-3次后加光学树脂胶与盖片封固，然后镜检。
染色结果：
1、细胞核染紫色，细胞浆染红色。
2、红细胞染成淡红色。
三、湖蓝染色：
试剂：
1、第一液：盐基性湖蓝1g,过锰酸钾1g,分别溶于ml蒸馏水的烧瓶内煮沸溶解。继续将过锰酸钾溶液倒入盐基性湖蓝溶液中混合之。再煮沸25分钟，趁热过滤即可。
2、第二液：伊红1g(国产曙红)溶于10ml蒸馏水内，再加95%乙醇85ml。
配制第1液所用的蓝湖，市售者有深蓝、灰蓝、紫兰三种，而品种有粘糊状和粉末状两种，配制时需要紫兰色粉末状盐基性湖蓝。过锰酸钾有结品和粉末状两种，配制时宜采用粉末状产品。
配制第2液，亦可用5%石碳酸代替95%乙醇，即（1g国产曙红加5%石碳酸液ml）,但染色偏红，因此，在用此液时，染色时间应短，玻片放入后立即取出（约1秒）水洗。
操作方法：
1、将涂片先固定在95%乙醇内15分钟，取出后浸染在第1液内4秒，然后水洗。
2、浸染第2液内4秒后，然后水洗，在浸入第1液内复染4秒以上，水洗待干，即可镜检。
涂片最后复染时间的长短，可随需要而增减，水洗后涂片呈紫蓝色即可。如颜色过浅，可再复染1-2秒。如果过深，可放乙醇中1-2秒，退去部分染液。
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