免疫组化全称为免疫组织化学染色技术，是用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞的定性、定位或定量研究。基本实验原理是根据抗原抗体反应和化学染色原理，利用组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，一抗再与标记过的二抗进行反应，最后通过化学染色对标记物进行显示，从而对组织或细胞内的抗原物质进行定性、定位与定量。
免疫组化是一项生物实验学中最基本的技术，简单易学应用广，无论是cell、nature、science，还是中文核心，都会时不时地出现它的身影，真可谓“上得了厅堂，下得了厨房”。那么，作为科研小白的我们，能够尽快熟练掌握和应用这门技术就显得非常必要，我在摸索了3个月之后终于有所心得，现将完整实验步骤记录如下，以供“游客”速成：
一：石蜡制片
固定：用手术室“福尔马林”固定液在标本取下10分钟内浸泡至少12h，最多3天内将浸泡液换成科室内的75%消毒常用酒精
梯度酒精脱水：80%、95%、%酒精脱水各1h
透明：二甲苯替代物（格式液1和2）各浸泡15min
包埋：用石蜡机包埋40min制作蜡块
切片：5-7微米
摊片：45摄氏度水温
烤片：65摄氏度，烤30min
二：玻片染色
1.脱蜡及透明：65摄氏度恒温箱中至少40min，于二甲苯替代物（格式液1和2）各浸泡5min
2.梯度水化：%、95%、80%、75%酒精中各5min
3.冲洗：自来水反复冲洗5min2次
4.抗原修复：抗原修复液“火锅”模式煮沸加热至少40min，后室温自然冷却
5.冲洗：PBS溶液冲洗2次（别倒PBS）
6.封闭：载玻片甩干，3%H2O2溶液阻断内源性过氧化物酶于黑盒中20min
7.冲洗：PBS溶液2次
8.封闭：载玻片甩干，正常山羊血清封闭液20min，同时开始配1抗
9.加1抗：NY（1:）、GPC（1:）、Mage(1:)、PLAC（1:）、空白组加PBS溶液对照，将反复冲洗用过的PBS溶液倒入黑盒中以防湿片，4摄氏度冰箱中静置过夜
（所有小溶剂使用前均要配平摇匀，配制好之后再次配平摇匀）
10.冲洗：取出室温复温30min，PBS溶液冲洗2次，每次5min
11.滴加2抗：加IgG二抗，室温静置40min
12.冲洗：PBS溶液冲洗2次，每次5min(玻片上滴加试剂时必须甩干檫净，冲洗时甩干即可)
13.显色：1ml:20微升配制DAB显色液，滴加时间最多5min（时间一到，即刻甩干），显微镜下掌握染色程度
14.终止反应：自来水流水冲洗2次，每次5min
15.复染：苏木素（R5，无需分化）复染细胞核1min，显微镜下掌握染色程度
16.终止反应：自来水流水冲洗2次，每次5min
17.梯度脱水：75%、80%、95%、%酒精中浸泡各5min
18.透明：格式液2透明5min
19.封片：滴加中性树胶，盖盖玻片，封片镜检
一次免疫组化整个过程大概需要3个半天，实验过程中肯定会出现打退堂鼓的小心思，needpreservence，静待“春暖花开”！！！
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