所需试剂：
二甲苯、无水乙醇、蒸馏水；
抗原修复液（pH6.0枸橼酸缓冲液，或pH9.0EDTA）；
H2O2、山羊血清、DAB、亲和素、PBS、一抗、二抗等（购买Kit和一抗即可）；
苏木素、酸乙醇（5ml浓盐酸+ml无水乙醇）；
中性树脂
1.石蜡切片入烤箱60℃，烤片60min(烤片不充分会影响脱蜡)
（摊烤片一体机）
2.石蜡切片依次入
二甲苯Ⅰ5min，二甲苯Ⅱ5min，二甲苯Ⅲ5min
无水乙醇5min、95%乙醇5min、85%乙醇5min、75%乙醇5min，蒸馏水5min
（PBS冲洗3次）
以上步骤为脱蜡，脱蜡不彻底会影响染色。
切片脱蜡缸内的液体应完全没过切片，并要经常更新。
3.切片放入抗原修复液中，电锅加水加热，沸腾后煮8分钟，室温冷却
（是的，你没有看错，就是用电饭锅来煮）
以上步骤为抗原修复，直接影响染色效果，若内参或表达量较高的蛋白在染色时仍无表达，则可能是抗原修复未完全。
4.PBS充分漂洗3次，加入适量（每滴为50-60μl）3%的H2O2-蒸馏水溶液，以阻断内源性过氧化物酶活性，室温下孵育10min
5.PBS充分淋洗3次，加入适量的山羊血清，室温孵育10分钟，甩干
6.滴加μl一抗（5%BSA稀释），孵育（放入4℃冰箱过夜）
若抗体不回收或时间紧急，可选择在室温孵育2h。
7.PBS充分淋洗3次，滴加适量二抗，室温孵育10min
8.PBS充分淋洗3次，滴加适量HRP标记的链霉亲和素，室温孵育10min，PBS充分淋洗
9.配置DAB溶液（50μlA:1mlB），配好的显色液在4度避光1小时内有效
10.滴加显色液，显微镜下观察，显色时间1-5min，效果满意后自来水冲洗终止染色
以上为免疫组化特异性染色环节，在显微镜下检查完毕确认染色成功再进行HE染色
有人会用组化笔圈出组织切片的位置，画疏水圈节省试剂。不过组化笔价格也不低，多放点试剂也就没有相应的问题，可以偷懒不圈。
11.苏木素复染3min，自来水冲洗三次
12.酸乙醇分化6-10s，自来水冲洗三次
自来水3min，70%乙醇5min，80%乙醇5min，90%乙醇5min，无水乙醇5min
二甲苯Ⅰ5min，二甲苯Ⅱ5min
放置通风橱内晾干
以上为HE染色和脱水环节，应注意脱水缸和最开始的脱蜡缸不可混用。
13.中性树胶封片，盖盖玻片。
1.File-Open，导入免疫组化图片；
2.Image-type，将RGBColor改成RGBstack
3.滚动滑轮，调整图片对比度，这时的图片只有红绿蓝三通道，选择最合适的即可
4.Image-adjust-Threshold，Default的B＆W改成Red
5.调节上下两个滑轮，选择阳性信号区域最合适的，set-ok
6.analyze-setmeasurement-对话框-勾选areafraction（这一步第一次做即可，后面重复时不需要修改）
7.analyze-measurement，%Aera就是需要的结果
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