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关于HE染色技术,这些事情你不可不知

  • 来源:本站原创
  • 时间:2020/10/4 10:23:47

病理诊断一直被称为疾病诊断“金标准”,质量上乘的染色切片则是病理医生作出正确病理诊断的关键。HE染色作为目前国内外病理诊断上广泛采用的常规染色方法,更是每位病理医生必须掌握的技术之一。

常规病理技术—HE染色

HE染色全名为苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色方法,是常规病理染色中最基本的染色技术,作用在于通过它染色后的样本,

能够清楚地、细微地辨别正常组织和病理组织的形态结构,对科研和临床都起到了很大的辅助判断作用。

H-E染色评定标准

1.切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕;

2.染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观。

HE染色原理

细胞核染色的原理

苏木精为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,在DNA的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,

使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。

细胞浆染色的原理

伊红为化学合成的酸性染料,在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质,为两性化合物,细胞浆染色与染液的pH在胞浆蛋白质等电点(4.7—5.0)以下时,

胞浆蛋白质以碱式电离,则细胞浆带正电荷,就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子,与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合,使细胞浆着色,呈现红色。

分化作用

染色后,用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去,这个过程称为分化作用,所用的溶液称为分化液。

在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液,因酸能破坏苏木精的醌型结构,使组织与色素分离而褪色。经苏木精染色后,必须用0.5%盐酸乙醇分化,

使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去,在进行伊红染色,才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。因此,在HE染色中分化是极为关键的一步。

返蓝作用

分化之后,苏木精在酸性条件下处于红色离子状态,呈红色,在碱性条件下处于蓝色离子状态,呈蓝色。

组织切片经0.5%盐酸乙醇分化后呈红色或粉红色,故分化之后,立即用水除去组织切片上的酸而终止分化,

再用弱碱性水(0.2%氨水)使苏木精染上的细胞核呈现蓝色,这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝,但所需时间较长。

H-E染色操作步骤

——固定液:常用95%乙醇和冰丙酮

——苏木精染液:称取苏木精粉0.5g,铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中,然后取NaIO31g,水5ml,再加入甘油30ml和冰醋酸2ml,混合均匀,滤纸过滤,备用。

——伊红染液:称取0.5g水溶性伊红染液,溶于ml蒸馏水中。

——稀盐酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%盐酸。

——系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。

1.样品制备

对于贴壁生长细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约1×/ml,滴加于盖玻片上(置于6孔板中),培养相应时间后,取出细胞爬片,用PBS洗涤3次。

2.样品固定

95%乙醇固定20min,PBS洗涤2次,每次1min。

3.苏木素染细胞核

切片入Harris苏木素染3-8min,自来水洗,1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗,0.6%氨水返蓝,流水冲洗。

4.分色

镜下观察,若细胞核染色过深,用1%盐酸酒精溶液分色数秒,自来水洗涤。

5.伊红染细胞质

浸入伊红染液染色1min,自来水洗涤。

6.脱水封片

将切片依次放入95%酒精I5min-95%酒精II5min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-二甲苯Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。

7.显微镜检,图像采集分析

其实,染色不仅是病理诊断过程中必不可少的步骤,更是远程病理诊断的前提条件。

只有做到标准化的病理样本染色,才能在现今“互联网+医疗”模式下,实现后续的远程病理诊断。

福怡股份潜心研发十余年,制成梵缇斯自动染片机,医院染色标准,精准把控染色程序。

实现密闭、恒温、恒压、恒定pH值条件控制的同时可耐强酸、强碱及有机溶剂腐蚀,保证了切片标准化的前处理染色,保障了远程病理传输的前端质量,医院病理远程诊断提供了坚实的物质基础。

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