脂肪
脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分,不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上,脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。
脂肪主要存积于脂肪组织中,并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。
油红O为脂溶性染料,在脂肪内能高度溶解,可特异性的使组织内甘油三酯等中性脂肪着色。
脂类染色,用冰冻或石蜡切片,以水溶性封固剂封固,如甘油明胶和阿拉伯糖胶等。
原理和应用
在病理检验中,脂类染色法最常用以证明脂肪变性,脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料,最常用的有苏丹Ⅲ,苏丹Ⅳ,苏丹黑及油红O等。苏丹类的油红O染料在脂类中的溶解度大于在有机溶剂的溶解度,所以染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去,使脂质显现出红色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时,对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理,适当提高温度(37℃-60℃)对组织切片染色效果是有好处的。
固定方法
组织常规用中性福尔马林固定,但用甲醛-钙液(40%甲醛10ml,蒸馏水90m1,氯化钙1g)固定效果更好,这样有利于保存磷脂。
试剂配制
1、油红O基液
油红O2.5g+异丙醇50ml
60℃烘箱中24~72h充分溶解。
2、油红O工作液
油红O基液18ml与蒸馏水12ml混合静置10min后过滤。
3、甘油明胶
明胶5g
甘油35ml
水30ml
明胶在水中浸透,加热至35℃溶化,加甘油搅和,纱布过滤后使用。
染色步骤
1、冰冻切片入固定液中固定15min。
2、蒸馏水洗2min。
3、60%异丙醇水溶液2s。
4、入油红O工作染液15min(临用前配)。
5、60%异丙醇水溶液2s。
6、自来水洗2min。
7、Mayer苏木素30s。
8、甘油明胶封片。
染色结果
结果:脂质沉积的心肌细胞或血管壁平滑肌细胞质内可见着染呈红色脂滴颗粒,为阳性反应。
图文供稿:刘大卫
图文编辑:胡志洁
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